weill面经
本帖最后由 矻矻 于 2016-5-3 22:14 编辑抱歉内容已删。欢迎有问题小窗问。 吃吃真棒！很收益啊！ lz报下背景让大家眼馋一下吧 cpf1的蛋白比较小，所以效率会比较高吧，特别是对于mammalian cell？ shorten variant是指用17-18bp的gRNA instead of 20bp gRNA？FZ他们组新的paper改变Cas9 protein的电性，好像效果更好一些。那个Cre是指cre-loxp嘛？ 赞吃吃，很有用的信息 火前刘明，ku神棒呆！ 风撩月影 发表于 2016-1-31 02:08 static/image/common/back.gif
吃吃真棒！很收益啊！
{:baitun:}3Q xuhaiqing 发表于 2016-2-2 06:16 static/image/common/back.gif
cpf1的蛋白比较小，所以效率会比较高吧，特别是对于mammalian cell？
cpf1貌似是homodimer切的时候，是有别人做了效率对比么？我只看了zf那个，一个点是5’overhang的切口可以促进NHEJ，因为大多数自然状态HR比较多，然后那个老师表达了对这个结果的不信任orz~(感觉涉及到DNA repair选择就比较复杂有点儿不好说 xuhaiqing 发表于 2016-2-2 06:22 static/image/common/back.gif
shorten variant是指用17-18bp的gRNA instead of 20bp gRNA？FZ他们组新的paper改变Cas9 protein的电性，好 ...
那个变异体是在蛋白氨基酸链上的变异，缩短然后减少蛋白和DNA结合力，减少off-target.然后那个老师说，在减少也不好用到临床哈哈。。我想做个定点插入，用crispr不好筛选，因为不想插入荧光或者抗生素基因，其实我们组都没做过，然后他让我试试cre-loxp.
（小青怎么也对这个感兴趣，这是涉猎广泛哈哈～ Oceanus_CNS 发表于 2016-2-2 06:48 static/image/common/back.gif
火前刘明，ku神棒呆！
{:b_0001:}海洋客气～ 矻矻 发表于 2016-2-2 11:21 static/image/common/back.gif
cpf1貌似是homodimer切的时候，是有别人做了效率对比么？我只看了zf那个，一个点是5’overhang的切口可以 ...
哦对，我想起来了。好像是说是因为不是blunt end，对NHEJ有好处。可能是针对knock out而言吧。这样也不用加repair DNA。有的organism也没有HR的机制。 矻矻 发表于 2016-2-2 11:33 static/image/common/back.gif
那个变异体是在蛋白氨基酸链上的变异，缩短然后减少蛋白和DNA结合力，减少off-target.然后那个老师说，在 ...
你是做什么细胞啊？Loxp比较简单，但是也要有抗性基因来筛选吧。当然你不追求很干净的insertion，loxp还是很快捷的。我们组很早就做cas9（好像从12、13年的样子）。 xuhaiqing 发表于 2016-2-3 00:29 static/image/common/back.gif
你是做什么细胞啊？Loxp比较简单，但是也要有抗性基因来筛选吧。当然你不追求很干净的insertion，loxp还是 ...
膜小青！小窗问！{:rose:} 好详细的面经，太赞了！之前一直在想跟老师讨论的时候应该问些什么问题，这里面很多都可以拿来借鉴了嘿嘿……
另外祝吃吃在36岁后找到一个能安慰你的胃的好老公哈哈{:naoyy:}
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