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[未归类] weill面经 [复制链接]

矻矻
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楼主
发表于 2016-1-30 21:52:52 |只看该作者 |倒序浏览
本帖最后由 矻矻 于 2016-5-3 22:14 编辑

抱歉内容已删。欢迎有问题小窗问。
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本土, 面经, 美国, 生物

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风撩月影
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沙发
发表于 2016-1-31 02:08:31 来自手机 |只看该作者
吃吃真棒！很收益啊！
双非DIY美硕申请总结

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jbourne01
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板凳
发表于 2016-2-1 23:25:25 |只看该作者
lz报下背景让大家眼馋一下吧

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xuhaiqing
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地板
发表于 2016-2-2 06:16:08 |只看该作者
cpf1的蛋白比较小，所以效率会比较高吧，特别是对于mammalian cell？

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xuhaiqing
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5楼
发表于 2016-2-2 06:22:12 |只看该作者
shorten variant是指用17-18bp的gRNA instead of 20bp gRNA？FZ他们组新的paper改变Cas9 protein的电性，好像效果更好一些。那个Cre是指cre-loxp嘛？

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xuhaiqing
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6楼
发表于 2016-2-2 06:22:30 |只看该作者
赞吃吃，很有用的信息

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Oceanus_CNS
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7楼
发表于 2016-2-2 06:48:38 |只看该作者
火前刘明，ku神棒呆！

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矻矻
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8楼
发表于 2016-2-2 11:18:29 |只看该作者
风撩月影 发表于 2016-1-31 02:08
吃吃真棒！很收益啊！

3Q

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矻矻
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9楼
发表于 2016-2-2 11:21:28 |只看该作者
xuhaiqing 发表于 2016-2-2 06:16
cpf1的蛋白比较小，所以效率会比较高吧，特别是对于mammalian cell？

cpf1貌似是homodimer切的时候，是有别人做了效率对比么？我只看了zf那个，一个点是5’overhang的切口可以促进NHEJ，因为大多数自然状态HR比较多，然后那个老师表达了对这个结果的不信任orz~(感觉涉及到DNA repair选择就比较复杂有点儿不好说

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矻矻
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10楼
发表于 2016-2-2 11:33:49 |只看该作者
xuhaiqing 发表于 2016-2-2 06:22
shorten variant是指用17-18bp的gRNA instead of 20bp gRNA？FZ他们组新的paper改变Cas9 protein的电性，好 ...

那个变异体是在蛋白氨基酸链上的变异，缩短然后减少蛋白和DNA结合力，减少off-target.然后那个老师说，在减少也不好用到临床哈哈。。我想做个定点插入，用crispr不好筛选，因为不想插入荧光或者抗生素基因，其实我们组都没做过，然后他让我试试cre-loxp.
（小青怎么也对这个感兴趣，这是涉猎广泛哈哈～

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矻矻
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11楼
发表于 2016-2-2 11:34:27 |只看该作者
Oceanus_CNS 发表于 2016-2-2 06:48
火前刘明，ku神棒呆！

海洋客气～

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xuhaiqing
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12楼
发表于 2016-2-3 00:24:19 |只看该作者
矻矻 发表于 2016-2-2 11:21
cpf1貌似是homodimer切的时候，是有别人做了效率对比么？我只看了zf那个，一个点是5’overhang的切口可以 ...

哦对，我想起来了。好像是说是因为不是blunt end，对NHEJ有好处。可能是针对knock out而言吧。这样也不用加repair DNA。有的organism也没有HR的机制。

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xuhaiqing
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13楼
发表于 2016-2-3 00:29:57 |只看该作者
矻矻 发表于 2016-2-2 11:33
那个变异体是在蛋白氨基酸链上的变异，缩短然后减少蛋白和DNA结合力，减少off-target.然后那个老师说，在 ...

你是做什么细胞啊？Loxp比较简单，但是也要有抗性基因来筛选吧。当然你不追求很干净的insertion，loxp还是很快捷的。我们组很早就做cas9（好像从12、13年的样子）。

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矻矻
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发表于 2016-2-3 08:24:33 |只看该作者
xuhaiqing 发表于 2016-2-3 00:29
你是做什么细胞啊？Loxp比较简单，但是也要有抗性基因来筛选吧。当然你不追求很干净的insertion，loxp还是 ...

膜小青！小窗问！

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万里追风兽
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15楼
发表于 2016-2-4 10:39:03 |只看该作者
好详细的面经，太赞了！之前一直在想跟老师讨论的时候应该问些什么问题，这里面很多都可以拿来借鉴了嘿嘿……
另外祝吃吃在36岁后找到一个能安慰你的胃的好老公哈哈

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