[未归类] 选实验室纠结啊！！！ [复制链接]

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发表于 2009-4-11 16:23:00 |显示全部楼层

为什么都喜欢第二个..? 要是实验室条件还可以忍受的话我选第一个其实就和我现在的老板差不多从不过问学生我们过得很滋润~~

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发表于 2009-4-11 16:24:01 |显示全部楼层

我有做你的2和3。。。
问题是我的细胞不应该死不知道为啥一转了我那质粒就挂很多
Guessy 发表于 2009-4-11 16:18

我的细胞也不应该死。。它就是容易死
如果你细胞也这样，用fugene6试一下，这是毒性最低的。

人生有些决定是大胆的，但是那并不代表这些决定是错误的。

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发表于 2009-4-11 16:28:01 |显示全部楼层

我的细胞也不应该死。。它就是容易死
如果你细胞也这样，用fugene6试一下，这是毒性最低的。
lingli_xiaoai 发表于 2009-4-11 16:24

确定是lipo2k的毒性么？我总怀疑是我那质粒有问题那东西转进去以后E.coli都不爱长。。。
另外最近发现那破质粒的promoter不够强决定换一个我还得重新搞克隆 14kb的大质粒弄死我得了

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发表于 2009-4-11 16:30:21 |显示全部楼层

对了我还想说一句
我最开始在zju进实验室的时候去的是一个说实话挺烂的地方
当时几乎所有的原因就是因为那实验室的小老板长得帅人又好。。。偶极其地喜欢
但现在想想这不能作为主要因素
lz还是考虑下你究竟是喜欢那个AP 还是真的喜欢他的实验室和科研

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发表于 2009-4-11 16:30:44 |显示全部楼层

条件挺好了

曾经一天3轮western的生活让我对配胶都快有阴影了
草木也知愁发表于 2009-4-11 12:58

仰慕

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发表于 2009-4-11 16:33:41 |显示全部楼层

确定是lipo2k的毒性么？我总怀疑是我那质粒有问题那东西转进去以后E.coli都不爱长。。。
另外最近发现那破质粒的promoter不够强决定换一个我还得重新搞克隆 14kb的大质粒弄死我得了
Guessy 发表于 2009-4-11 16:28

如果是lentivirus vector 本来在ecoil里面就会让ecoil长得很慢，我的质粒太多如此
如果是我两个办法，改变ratio，就是lipo的用量，和质粒的量，看看有没有改善
其次，用别的细胞系做。我觉得是lipo2k毒性的对这个细胞系的主要理由是，5种方法里面，只有用这个和CAtansfection细胞会死很多，其次就是别的细胞系都能用，你把你的质粒转HEK293，如果这个都死，基本上可能就是质粒的问题了，这个细胞系简直是转染一绝，没什么转不了的。到目前为止。

人生有些决定是大胆的，但是那并不代表这些决定是错误的。

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发表于 2009-4-11 16:37:19 |显示全部楼层

我用的就是HEK啊。。。多少号我不清楚的说
开始都长得好好的转了之后一天看中间就基本空了后来减少DNA量就好了些
但转化效率依然很低 FRET下看不到什么正经东西
我的貌似不是lenti

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发表于 2009-4-11 16:38:04 |显示全部楼层

对于质粒，我当时subclone了2个月才把需要的质粒克隆出来。。换了好多个vector，最后终于弄出来stble cell line没有几天就给我gene沉默我都快疯了。。这些实验就是tmd发明出来折磨我的

人生有些决定是大胆的，但是那并不代表这些决定是错误的。

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发表于 2009-4-11 16:40:27 |显示全部楼层

对于质粒，我当时subclone了2个月才把需要的质粒克隆出来。。换了好多个vector，最后终于弄出来stble cell line没有几天就给我gene沉默我都快疯了。。这些实验就是tmd发明出来折磨我的
lingli_xiaoai 发表于 2009-4-11 16:38

哈哈话说我这个大质粒克隆了8个月。。。
不过我倒是无所谓我也不毕业。。。
坚决不读phd 除非实在没地方去
再混混就找个时间结束我的research生涯
我真的怕干10年这个以后宝宝都会有变异

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发表于 2009-4-11 16:41:14 |显示全部楼层

这些实验就是tmd发明出来折磨我的
lingli_xiaoai 发表于 2009-4-11 16:38

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发表于 2009-4-11 16:49:13 |显示全部楼层

我用的就是HEK啊。。。多少号我不清楚的说
开始都长得好好的转了之后一天看中间就基本空了后来减少DNA量就好了些
但转化效率依然很低 FRET下看不到什么正经东西
我的貌似不是lenti
Guessy 发表于 2009-4-11 16:37

死的话，都是transfection 24小时后的事情。
估计跟质粒有关系，我现在用新cell line都先用GFP的vector转进去看看效率如何。。
HEK最烦的就是它贴板不劳，很容易detach。。不过如果大部分细胞还在，其实也行，我是几乎死绝，细胞死90%

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发表于 2009-4-11 16:50:48 |显示全部楼层

哈哈话说我这个大质粒克隆了8个月。。。
不过我倒是无所谓我也不毕业。。。
坚决不读phd 除非实在没地方去
再混混就找个时间结束我的research生涯
我真的怕干10年这个以后宝宝都会有变异
Guessy 发表于 2009-4-11 16:40

没有毕业的压力就好了。。做不出来就算了。。没什么。。
做不出来的project太多了。。我都换了project，还不是卡死在这上面。

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发表于 2009-4-11 16:52:26 |显示全部楼层

我的HEK只要有一点点GFP就很多亮的
detach不是要在inoculate的时候加什么东西么我忘了我一般不干这个
我的细胞还是有活的但中间能显著的看出来死了很多而且转化效率极低貌似表达出来的东西还不functional
可怜我8个月的克隆结果老板还对这个特有兴趣。。。

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发表于 2009-4-11 16:52:56 |显示全部楼层

唉唉我现在咋也搞得跟一phd似的。。。

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发表于 2009-4-11 16:58:16 |显示全部楼层

我的HEK只要有一点点GFP就很多亮的
detach不是要在inoculate的时候加什么东西么我忘了我一般不干这个
我的细胞还是有活的但中间能显著的看出来死了很多而且转化效率极低貌似表达出来的东西还不functional
可怜 ...
Guessy 发表于 2009-4-11 16:52

用不着给自己那么大压力，我们实验室本科人几乎没一个人做出来能用的结果，还不是照样拿offer
我就为了检查我的基因functional还是不functional天天就荧光双报告系统，这东西可是3个以上质粒的co-trans。。把这些东西克隆出来以后我已经半死了。。
想了一下，我进graduate school就不到2年，比人家3-4年作的实验种类都多。

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