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楼主: ezhaoheng
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[(微)生物] 研三微生物专业硕士真心求定位,望各位多多帮助,谢谢! [复制链接]

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发表于 2011-10-14 12:18:32 |只看该作者
我觉得PCR不难啊,常规克隆好像也不难,就是片段大了要难一些。

我以为国外经验比我们足,试剂好,然后实验做起来很快呢。我看那些SCI上面动不动就构建十几个质粒,研究几个基因功能的。看来也不是很轻松就做出来的啊

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囧章 Gemini双子座 枫情万种 一帆枫顺   枫华绝代 荣誉版主

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发表于 2011-10-14 12:32:53 |只看该作者
PCR难不难看你P的是神马 我当年P的那东西GC含量要多高有多高 死也P不出

克隆这种低水平重复性劳动真没有啥经验可讲啊 几十个质粒 无所谓啊 花5000块雇3个学生没日没夜地干 几天就出来了。。。
休假中 站内短信看不到 请见谅
紧急问题请发电子邮件 guessywang@gmail.com
不加QQ和人人 请见谅

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发表于 2011-10-14 14:29:18 |只看该作者
好吧,我算是长见识了。。。

有没有人雇我去做克隆啊。。。

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发表于 2011-10-16 09:47:42 |只看该作者
同微生物的飘过。
为什么你们考虑这么多技术因素呢?果然是高技术人才啊.....
像我这种不愿意动脑筋的废柴,遇到克隆的问题,两次常规数量弄不出来,就会在通用条件下搞一次大批量重复,电转化,一次性转20块板子,所有菌落挑光,一次提一千个质粒,基本两三天就出阳性结果了。
反正提质粒的流程可以简化再简化,这种不需要质量的质粒里面的蛋白质我都不处理的.......

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发表于 2011-10-16 14:42:23 |只看该作者
一千个质粒?楼上人才,求提质粒protocol!!!

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发表于 2011-10-16 22:37:10 |只看该作者
一千个质粒?楼上人才,求提质粒protocol!!!
ezhaoheng 发表于 2011-10-16 14:42


指形管接菌,一个指形管架放48个指形管,用塑料膜包起来37°摇,弄10个指形管架。
溶液一,溶液二,溶液三,不用氯仿抽提,直接酒精沉淀20MIN,这20MIN提下一批,直接跑胶,跑那种大胶。胶好了,下一批也酒精沉淀结束了。
轮着转,半天480个质粒就搞定了,如果还没有,就走下一批480个。

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发表于 2011-10-16 23:28:19 |只看该作者
指形管?是说1.5ml离心管吗?还是说200ul的pcr管?楼上有排枪没?我们没有,一枪一枪加,20分钟做完估计够呛。并且接菌怎么接的?牙签点接的吗?培养基里加抗生素吗?(我们用的氨苄)

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发表于 2011-10-16 23:43:42 |只看该作者
指形管?是说1.5ml离心管吗?还是说200ul的pcr管?楼上有排枪没?我们没有,一枪一枪加,20分钟做完估计够呛。并且接菌怎么接的?牙签点接的吗?培养基里加抗生素吗?(我们用的氨苄)
ezhaoheng 发表于 2011-10-16 23:28


1.5或者2的。有排枪。
白色枪头高压,酒精棉球把10ul移液器头擦得干干净净,然后点一下单菌落,把枪头直接打到指形管里,关上管子,直接去摇菌。

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发表于 2011-10-17 15:11:38 |只看该作者
明白了,谢谢!

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分享之阳 Gemini双子座 荣誉版主 US Advisor US Assistant 美版友情贡献 VISA版特殊贡献

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发表于 2011-10-23 04:02:37 |只看该作者
同微生物的飘过。
为什么你们考虑这么多技术因素呢?果然是高技术人才啊.....
像我这种不愿意动脑筋的废柴,遇到克隆的问题,两次常规数量弄不出来,就会在通用条件下搞一次大批量重复,电转化,一次性转20块板子, ...
dy008 发表于 2011-10-16 09:47
niuren...

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发表于 2011-10-25 11:24:28 |只看该作者
70# lian_zhuxi

学生物的没有牛人.....
俺只是一个天天被高中同学鄙视的傻蛋.....妈的读间谍学校的现在都混得比我好的多!!!!
前几天实验室硕士们查公务员,发现我们这个方向,硕士招的很多,博士一个也不需要......

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研三微生物专业硕士真心求定位,望各位多多帮助,谢谢!
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